| 產(chǎn)品名稱 |
人脂肪干細胞永生化 |
| 商品貨號 |
MZ-4047 |
| 中文名稱 |
人脂肪干細胞永生化 |
| 組織來源 |
人的正常脂肪組織。 |
| 形態(tài)特征 |
長梭形細胞，不規(guī)則細胞 |
| 生長特性 |
貼壁培養(yǎng) |
| 特征特性 |
根據(jù)不同來源及分化階段，干細胞可分為胚胎干細胞和成體干細胞胚胎干細胞具有分化為多種不同組織的能力，但在倫理上存在爭議。成體干細胞因其來源廣泛、增殖能力強等特點，現(xiàn)已成為組織工程學研究的首選種子細胞。其中，脂肪干細胞作為組織工程修復的種子細胞，因其具有來源豐富、取材容易、增殖能力強等優(yōu)點，正受到越來越多的關(guān)注。 脂肪干細胞形態(tài)類似成纖維細胞，具有較強的增殖能力。在一定的誘導條件下，可分化為脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞、心肌細胞、上皮細胞等，具有多向分化潛能。 該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Tert基因。CD44免疫熒光染色為陽性，CD45免疫熒光染色為陰性 |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養(yǎng)條件 |
代間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)體系 |
| 細胞凍存步驟 |
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復蘇細胞步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
