| 產(chǎn)品名稱 |
雞氣管黏膜上皮細胞永生化 |
| 商品貨號 |
MZ-8026 |
| 中文名稱 |
雞氣管黏膜上皮細胞永生化 |
| 組織來源 |
實驗動物的正常氣管黏膜組織 |
| 形態(tài)特征 |
鋪路石狀細胞，不規(guī)則細胞 |
| 生長特性 |
貼壁培養(yǎng) |
| 特征特性 |
氣管以軟骨、肌肉、結(jié)締組織和黏膜構(gòu)成。軟骨為"C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。在近端下呼吸道的上皮表面，主要是纖毛上皮細胞，它與基底細胞及杯狀細胞一起構(gòu)成假復(fù)層上皮，到達氣管腔表面的大部分細胞為纖毛上皮細胞，基底細胞與基底膜相連，通過半橋粒固定于上皮，在遠端下呼吸道中，Clara細胞和基底細胞占優(yōu)勢，纖毛細胞已不存在，杯狀細胞數(shù)量減少，上皮形態(tài)更象柱狀，整個上皮存在于一薄層基底膜上，通過間質(zhì)結(jié)締組織組成的網(wǎng)狀層相互支撐，上皮下存在其它的結(jié)締組織和纖維細胞 |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養(yǎng)條件 |
上皮細胞培養(yǎng)體系 |
| 細胞凍存步驟 |
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。明舟生物按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復(fù)蘇細胞步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
