| 產(chǎn)品名稱 |
293 Cells,low passage |
| 商品貨號 |
MZ-2905 |
| 中文名稱 |
人胚腎細胞 |
| 組織來源 |
腎；以腺病毒5 DNA 進行轉(zhuǎn)化。 |
| 形態(tài)特征 |
上皮細胞 |
| 特征特性 |
293細胞是人胚胎腎細胞用剪切過的腺病毒5 DNA轉(zhuǎn)化得到。它們包含并表達腺病毒5的早期區(qū)段1。 它們包含并表達腺病毒5的早期區(qū)段1。 它們能互補E1失活的腺病毒突變株和載體，使其生長。 在DNA轉(zhuǎn)染檢測中它們是特別有效的受體細胞。 對于大多數(shù)即使不是全部人腺病毒的生長和溶菌斑測試，它們也表現(xiàn)很好。 這些細胞廣泛應(yīng)用于因缺失或代換E1序列引起的E1失活突變株和腺病毒載體的繁殖與滴定。 因此它們被用來構(gòu)建腺病毒載體。 用于構(gòu)建腺病毒載體最好使用低代數(shù)細胞，一般不超過40代。 對于保持這株細胞的優(yōu)良特性，正確的細胞培養(yǎng)方法十分重要。 |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養(yǎng)條件 |
MEM+10%FBS+1%PS |
| 細胞凍存步驟 |
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復蘇細胞步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
