一、細胞培養(yǎng)條件

細胞英文名稱 ATDC5

細胞中文名稱 小鼠胚胎瘤細胞

生長特性：貼壁

培養(yǎng)體系：DMEM+10%FBS

傳代方法：建議第一次 1:2 傳代

傳代情況：2 天換液

凍存條件：細胞庫無血清凍存液

備注：收集瓶中培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng)

二、細胞收到后處理

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到

細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)

格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置 2-4 小時。鏡下觀察：未超過 80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入 6ml 完全培養(yǎng)基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)；超過 80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）

三、細胞培養(yǎng)步驟

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?6cm 皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化

1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，

輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在 1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按 5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 5-6 ml 培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到 2ml 小管細胞，收到細胞后，用 75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm 培養(yǎng)皿，加入 5ml 左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過 80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過 80%，可直接進行傳代（方法同上）。

售后服務(wù)告知書

一、收到細胞處理方法

1. 收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時（視細胞密度而定）穩(wěn)

定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收

細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下

細胞狀態(tài)，100×，200×各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方

進行售后的依據(jù)。

2. 收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費重發(fā)一次細胞。

3. 由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩氐挠绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細胞

后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后是需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和

發(fā)現(xiàn)問題后與客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于 7 天。

4. 如客戶對細胞的種類、純度、活性等特性有疑問，需提供相應(yīng)的生物學(xué)實驗檢測結(jié)果作

為依據(jù)。

二、細胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)； 

2. 細胞污染問題，請在收到產(chǎn)品 48 小時內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā)； 

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置 24 小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后 24 小時后，絕大多數(shù)細胞 未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)； 

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后 24 小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置 4 小時候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)； 

5. 細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 7 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定

細胞活力，核實后予重發(fā)； 

6. 細胞收到當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照，3 天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7 天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前 3 天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的 50%收費重發(fā)。